ACQUITY UPLC和ACQUITY Premier BEH色譜柱的清洗、再生和存放

更新時間:2024-10-17      點擊次數(shù):906

a. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變、譜峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時間改變、分離度變化或柱壓升高,說明色譜柱可能已被污染。通常情況下,用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗(小心避免緩沖鹽出現(xiàn)析出)就足以去除污染物。如果沖洗不能解決問題,可采用以下清洗和再生步驟。

  根據(jù)樣品和/或您認(rèn)為污染色譜柱的物質(zhì)的性質(zhì),選擇與之匹配的常規(guī)清洗方法(見表3)。

  請使用20倍柱體積的溶劑沖洗色譜柱。升高柱溫可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差,請致電當(dāng)?shù)氐奈痔厥擂k事處獲得更多支持。

  50:50乙腈/水沖洗BEH HILIC色譜柱,去除極性污染物。如果此沖洗操作不能解決問題,可用5:95乙腈:水沖洗色譜柱。

  要清洗BEH Amide色譜柱中的極性污染物,請運(yùn)行10 min內(nèi)水從0增加到100%的梯度。請注意,隨著水的比例上升,柱壓也將迅速增大。在含水量大于60%的條件下運(yùn)行時,請降低流速。必要時請重復(fù)該操作。

3.ACQUITY BEH色譜柱的推薦pH和溫度限值

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4.反相色譜柱清洗順序

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* 在使用THF或正己烷之前,確保系統(tǒng)與這些溶劑兼容。只有在利用純反相有機(jī)溶劑(如乙腈)無法清洗色譜柱時,方可考慮使用諸如THF或正己烷之類的溶劑。降低流速,使用較低的操作溫度并盡量減少系統(tǒng)與THF/或正己烷的接觸。

** 使用低有機(jī)溶劑含量的溶液,以避免出現(xiàn)緩沖鹽析出。

 

b. 存放

  如果反相色譜柱需要在室溫下存放超過四天,應(yīng)將其保存于100%乙腈中。對于高溫應(yīng)用,請在使用后立即使用100%乙腈保存色譜柱,以便盡可能延長色譜柱使用壽命。切勿使用

緩沖鹽保存色譜柱。如果流動相中含有緩沖鹽,則先用10倍柱體積(常規(guī)色譜柱體積請參見表1)的HPLC級水沖洗反相ACQUITY BEH色譜柱,再用100%乙腈替換柱內(nèi)的水,然后

儲存。如果不執(zhí)行這個中間步驟,在引入100%乙腈時,色譜柱內(nèi)可能會出現(xiàn)緩沖鹽析出。BEH Amide色譜柱在保存100%乙腈前先進(jìn)行梯度沖洗至100%乙腈以將所有水相溶劑從柱中沖洗干凈。將色譜柱完全密封,防止柱床因溶劑蒸發(fā)而變干。

  如果BEH HILIC色譜柱需要存放超過四天,應(yīng)將其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用緩沖液保存色譜柱。如果流動相中含有緩沖鹽,則用10倍柱體積的95:5乙腈:水沖洗色譜柱(常規(guī)色譜柱體積請參見表1)。

  注:如果色譜柱運(yùn)行了含甲酸鹽(如甲酸銨、甲酸等)的流動相,并且之后使用100%乙腈進(jìn)行沖洗,那么在重新安裝色譜柱并再次運(yùn)行含甲酸鹽的流動相時,柱平衡花費的時間可能略長。


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