BEH HILIC色譜柱的使用指南

更新時間:2024-10-22      點擊次數(shù):2007

1. 由于BEH HILIC色譜柱不含有鍵合相,因此pH操作范圍為1~9,操作溫度上限為45 ℃。

2. 與其他液相色譜柱一樣,BEH HILIC色譜柱在pH、壓力和溫度的極值下運行會縮短色譜柱使用壽命。

 

色譜柱平衡

1. 初次使用本色譜柱時,用50倍柱體積的50%乙腈: 50%水溶液(含最終濃度為10 mM的緩沖液)平衡色譜柱。

2. 初次進樣之前,用20倍柱體積的流動相(初始條件)平衡色譜柱。

3. 如果采用梯度條件,在進樣之間用8~10倍柱體積的流動相平衡色譜柱。

4. 色譜柱平衡不當會導致保留時間漂移。

 

流動相注意事項

1. 流動相或梯度中應始終保持至少3%的極性溶劑(例如3%/3%甲醇或2%/1%甲醇等)。這樣可以確保ACQUITY BEHHILIC顆粒始終保持水合狀態(tài)。

2. 流動相或梯度中應始終保持至少40%的有機溶劑(例如乙腈)。

3. 避免在HILIC流動相中使用磷酸鹽緩沖液以防止出現(xiàn)析出,但可以使用磷酸。

4. 相較于甲酸或醋酸等添加劑,使用諸如甲酸銨或醋酸銨的緩沖液可獲得重現(xiàn)性更好的結(jié)果。如果只能使用添加劑(例如甲酸等)而不是緩沖液,請使用0.2% (v:v)的濃度,而不是0.1%

5. 為了獲得理想峰形,應始終保持流動相/梯度中含有濃度為10 mM的緩沖液。

 

進樣溶劑

1. 如果可能,進樣溶劑應使用95%乙腈。極性溶劑(如水、甲醇和異丙醇)應減少到總體積的25%

2. 通用的進樣溶劑為75:25乙腈/甲醇,該溶劑可以很好地平衡分析物溶解性和峰形。

3. 請避免進樣溶劑中含水和二甲基亞砜(DMSO),這些溶劑將導致非常差的峰形。

4. 通過反相固相萃取(SPE)用乙腈置換掉水或DMSO。如果無法實現(xiàn),則用有機溶劑稀釋水或DMSO

 

其他技巧

1. BEH HILIC色譜柱專用于保留極性非常強的堿性化合物,而對于酸性、中性和/或非極性化合物的保留性能有限。

2. 分析小分子(< 200 Da)強極性堿性化合物時,理想流速范圍為0.4~0.8 mL/min

3. 相較于Atlantis™ HILIC硅基HPLC色譜柱,BEH HILIC色譜柱在梯度分析中的保留性降低20%,在等度分析中的保留性降低35%~65%。這是因為BEH顆粒表面的硅醇殘基濃度更低。

4. 切記水在HILIC分析中是非常強的溶劑。因此,必須去除或盡可能減少進樣溶劑中的水。

5. 初步探索色譜條件時,可運行95%乙腈至50%乙腈的梯度。若無保留,可運行95:3:2乙腈:甲醇:水相緩沖液的等度條件。

6. 可使用諸如甲醇、丙酮或異丙醇之類的極性溶劑代替水以增強保留性能。

7. 如果使用ACQUITY UPLC系統(tǒng),弱洗針液應嚴格按照初始流動相條件中的有機相百分比配制,否則分析物峰形或保留性能可能會受到影響。

8. 建議通過在工作流程中加入HILIC質(zhì)量控制(QC)參比物質(zhì)來監(jiān)控系統(tǒng)的運行狀況。


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