Symmetry色譜柱使用窄徑柱和小粒徑柱需要注意的問題及優化建議

更新時間:2024-09-27      點擊次數:1100

a. 使用窄徑(內徑<3.0 mm)色譜柱

  本節將介紹如何盡量減少柱外效應,并介紹在HPLC系統中盡可能提高窄徑色譜柱性能的原則。使用內徑3.0 mm的窄徑色譜柱時通常無需更改系統配置。但使用內徑2.1mm的色譜柱時,需要更改HPLC系統配置才能避免系統譜帶展寬體積過大。如果不恰當地更改系統配置,會因系統譜帶展寬體積過大而導致峰展寬,隨著峰體積減小,這會對峰寬造成嚴重影響。

 

b. 譜帶展寬體積對內徑2.1 mm的色譜柱性能的影響

注:在色譜柱后使用分流器會加劇譜帶展寬。

  系統優化可能對靈敏度和分離度產生巨大影響,對于配置了分流器的系統尤其如此。優化措施包括使用深度正確的錐箍以及盡可能減小管路內徑和長度。圖9給出了一個示例,通過

優化LC-MS/MS系統,測定代謝物的靈敏度和分離度提高了一倍。

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c. 未優化和優化LC-MS/MS系統對比:系統配置更改建議

1. 將微內徑檢測器流通池與內徑- 2.1 mm 色譜柱配合使用

注:為減小譜帶展寬體積而縮短流通池光程時,檢測器靈敏度也會隨之降低。

2. 盡可能減小樣品定量環體積。

3. 在泵和進樣器之間使用0.009英寸(0.25 mm)的管路。

4. 對于標準系統,其余連接也請使用0.009英寸(0.25 mm)的管路,對于窄徑(內徑2.1 mm)系統,其余連接請使用0.005英寸(0.12 mm)的管路。

5. 使用完全接合的(預切割)連接(如果使用不同供應商的色譜柱,請使用深度可調的入口)。

6. 檢測器的時間常數應縮小至0.2 s以下。

 

d. 沃特世小粒徑(3.5 -m)色譜柱-快速色譜分離

  填充3.5μm顆粒的沃特世色譜柱可實現更快速、更高效 的分離,而不會縮短色譜柱使用壽命。本節將介紹使用填充3.5μm顆粒的色譜柱進行分離時要考慮的5個參數。

注:為保留填料,填充3.5μ-m顆粒的色譜柱出口篩板較小。請勿反沖此類色譜柱。

1. 流速-3.5μm色譜柱的理想流速高于5μm色譜柱。使用此類色譜柱可以提高效率和縮短分析時間。但是,較高的流速會導致柱壓增加。請使用適合系統的流速。

2. 柱壓-3.5μm色譜柱的柱壓高于同尺寸的5μm色譜柱。縮短色譜柱長度可抵消柱壓增量,并縮短分析時間。

3. 溫度-使用較高的溫度可降低因粒徑較小而產生的柱壓(請參閱色譜柱維護和使用手冊第III.f.節中建議的溫度)。

4. 采樣速率-請使用大約每秒10個數據點的采樣速率。

5. 檢測器時間常數-請使用0.1 s作為時間常數,以實現快速分析。


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