Kromasil 色譜柱的使用與維護

更新時間:2022-09-22      點擊次數:2263

Kromasil 色譜柱的使用與維護

 

 

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色譜柱安裝與平衡

使用經過濾并脫氣的流動相( 不含任何緩沖液) *沖洗HPLC 泵和管線,確保系統中沒有氣泡。按照流向標簽( 位于色譜柱上) 指示的方向將色譜柱一端連接至進樣器,另一端不接檢測器。將泵流速設置為0.1 mL/min( 或系統允許zui低設置) 并在5 分鐘內增大至正常流速。

當色譜柱出口處有溶劑自由流出時停止泵送,擦拭出口端并將其連接到檢測器。

以正常流速和約10-30 倍色譜柱體積的流動相來平衡色譜柱。

 

檢測柱效

強烈建議用戶在收到Kromasil 原裝jin口色譜柱15 天內進行柱效檢測,并在整個使用周期內,

進行定期的柱效測試,以便隨時監測色譜柱的壽命情況。

 

運行參數

5 μm 3.5 μm 色譜柱最大耐受壓力400 Bar,2.5 μm 1.8 μm 色譜柱最大耐受壓力1000 bar。最高工作溫度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18C8C4,Phenyl

色譜柱時,流動相pH 控制在1.5-9.5 之間,這樣有利于延長色譜柱的使用壽命。

 

流動相的配置

僅使用HPLC 色譜純溶劑、水、最高純度的化學品和試劑。

使用前對所有流動相進行過濾和脫氣。

確保溶劑可互溶。

 

色譜柱的保存

色譜柱使用完畢后,應盡可能地沖洗掉殘留在色譜柱內的雜質和沉積物。保存在適合的儲存溶劑中,儲存溶劑可以參考COA 中建議使用溶劑。儲存環境需保持溫度穩定、避光,并注意檢查Peek堵頭,防止松動導致柱內溶劑流失。

 

色譜柱的清洗

柱壓升高,保留時間變化和柱效降低都是色譜柱被污染的表現。

多數情況下,通過正確的沖洗能夠解決上述問題。我們需要謹記的是越早沖洗或再生越會更容易的解決上述問題。

 

通常具有較強吸附的雜質都集中在色譜柱進口一端,zui簡單的方法是對色譜柱進行反沖。反沖的方法只對填裝緊密的色譜柱有效,柱性能也不會發生變化。

 

反沖時,請按照下述的一般步驟,使用特定溶劑對色譜柱進行清洗,并根據不同廠商的建議進行,以免損壞色譜柱。

 

反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1,

Phenyl,   PhenylHexyl)

未鍵合的硅膠柱(SIL)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. : 乙腈=95:5

b. 四氫呋喃

c. 乙腈: =95:5

d. 不含鹽的流動相

e. 流動相

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 異丙醇

b. 甲醇

c. 乙酸乙酯

d. 流動相

鍵合正相柱(CN, Diol)

用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18,

C18(w),   C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 三氯jia烷

b. 異丙醇

c. 二氯甲烷

d. 流動相

a. 使用20 倍柱體積的不含鹽流動相進行清洗

b. 梯度清洗

流動相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流動相B: 0.1%TFA 乙腈: 異丙醇=1 : 2

30 min 內,B 相從25% 升至100% 進行清洗,運行2 個梯度程序。

c. 流動相平衡,切勿將色譜柱保存在TFA

 

反沖時,請將流動相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測器。反沖時,請將流動相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測器。

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Kromasil 保護柱

色譜柱一旦污染,沖洗過程將非常耗時,建議使用保護柱減少對色譜柱的污染,

Kromasil 保護柱 :

Kromasil 色譜柱具有相同的填料,*佳保護色譜柱,同時不影響分析結果。

柱芯柱套式設計,成本低。

 

部分常規保護柱訂貨信息

貨號

描述

00000HHO

2.1-4.6 mm guard holder

00000KCO

2.1-21.2 mm guard coupler

M05CLNGC

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CLNSK

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CMNGC

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CMNSK

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CSNGC

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CSNSK

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05NHNGC

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05NHNSK

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05PHNGC

Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

M05PHNSK

Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit

S05CNNGC

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05CNNSK

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05SINGC

Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05SINSK

Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit

S05DINGC

Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05DINSK

Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit

 

 

 

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